Summary

Blood albumin, P.V.C., Hemoglobin, Total protein, ASAT and GGT levels were determined in a group of 13 sheep before and at 10, 27, 41, 55 and 62 days after treatment with Closantel, 5 mg/kg subcutaneously. No sideeffects were observed and no difference with controls was recorded.

Blood constituents of five sheeps were not affected by treatment with 15 mg/kg of Closantel.

Introducción

Los salicilanilides son drogas antihelmínticas efectivas contra Fasciola hepatica, Linneo 1758, y Haemonchus sp. (Verheyen et al., 1980). Dentro de éstas, Closantel (N-{5-cloro-4-[α-(4-clorofenil)-α-cianometil]-2-metilfenil}-2- hidroxi-3,5 diyodebenzamide) presenta además alguna actividad contra estados larvarios de Oestrus ovis, Hipoderma sp. y Dermatobia sp. (Van den Bossche et al., 1979).

Este hidrógeno-ionóforo es un potente desacoplador de la fosforilación oxidativa e inhibidor de la síntesis de ATP in vitro, tanto en la mitocondria de Fasciola hepatica (Kaner et al., 1980) como en la del hapatocito de rata (Van den Bossche et al., 1983). Sin embargo, en dosis terapéuticas (5 mg/kg de peso) ella no afectaría las mitocondrias obtenidas de corazón e hígado de rata a las 4 y 16 horas posteriores a su administración (Van den Bossche et al., 1979). Aparentemente sería la albúmina sérica, la responsable de provenir la acción deletérea de Closantel, al formar un complejo albúmina -closantel que no ingresaría a la mitocondria del huésped (Weinbach y Garbus, 1966; Van den Bossche y Verhoeven, 1983).

El objetivo de este trabajo fue estudiar si una dosis terapéutica de 15 mg/kg de peso y una mayor de 15 mg/kg de peso de Closantel, pueden determinar variaciones de algunos constituyentes sanguíneos que puedan estimar funcionalidad hepática en ovinos.

Materiales y métodos

Animales

De un predio libre de fasciolasis se seleccionaron 18 ovinos hembras de 28/36 kg de peso y 6 ovinos machos de 53 a 58 kg de peso de raza Suffolk-Down, clínica y hematológicamente sanos, los cuales fueron controlados por 40 días previos al tratamiento, para establecer su negatividad a Fasciola hepatica. Estos animales presentaban un bajo nivel de parasitismo gastrointestinal (promedio de 200 huevos de Nematodirus sp. y 100 huevos de otros estrongilidos por gramo de fecas). Los animales se mantuvieron en estabulación con agua ad libitum y alimentados con heno de alfalfa durante el ensayo.

Los animales se agruparon de la siguiente forma:

Grupo 1: 13 ovinos hembras a los que se les administró Closantel (5 mg/kg de peso) vía subcutánea. Grupo 2: 5 ovinos hembras, los cuales no fueron tratados con la droga (testigos). Grupo 3: 5 ovinos machos a los que se les administró Closantel (15 mg/kg de peso, vía subcutánea).

Exámenes

Los animales del grupo 1 y 2 fueron controiados hematológicamente el día de la dosificación (día 0) y a los 10-27-41-55-62 días post-tratamiento (p.t.); el día 65 p.t. fueron sacrificados para realizar un examen macroscópico del hígado y corroborar la negatividad a fasciolasis (González et al., 1983). El grupo 3 se controló hematológicamente al día del tratamiento y a los 5-14 y 28 días p.t.

El mismo día del examen hematológico se realizaron exámenes coproparasitarios.

Exámenes coproparasitarios:

- Técnica de Teuscher (Araya, 1967). - Recuento de huevos Cámara Mc Master (Tagle, 1970).

Exámenes Hemáticos

De cada animal en ayunas y en la mañana, se obtuvo 15 ml de sangre por punción de la vena yugular, depositando 5 ml en un tubo con anticoagulante (EDTA[1] 2 ml/mg) y 10 ml en un tubo estéril, sin anticoagulante. El suero obtenido fue centrifugado (1.000 x G por 10 minutos) y congelado a –20ºC hasta el momento de su uso.

Determinaciones:

1. Volumen Globular Aglomerado (V.G.A.) (1 /1) microhematocrito[2], (Schalm et al., 1975. 2. Hemoglobina (Hb) g/dl cianometahemoglobina (Schalm et al., (1975). 3. Proteína plasmática total g/dl (P.P.T.), refractómetro (Schalm et al., 1975). 4. Albúmina g/I Verde Bromo Cresol (590 mm) reactivos Boheringer-Mannheim[3>]. 5. Aspartato Amino Transferasa (A.A.T.) UI/  a 37°C, colorimétrico, reactivos Dade[4>]. 6. Gamma Glutamil Transferasa (G.G.T.) UI/ a 25°C, reactivos Boheringer-Mannheim[3>].

______________

[1] E.D.T.A. Sal sódica  del ácido etilendiamino tetroacético.
[2]

Centrífuga Adams Autocrite.

[3 Boheringer - Mannheim Diagnostics, Houston - Texas, USA.
[4] Dade Lab, Miami - Florida, USA

Resultados

En la Tabla Nº1 se entregan los valores de los constituyentes sanguíneos de los animales dosificados con Closantel (5 mg/kg) Grupo 1 y de los testigos Grupo 2, obtenidos previo y a los 10, 27, 41, 55 y 62 días post-dosificación. En él, se observa que el V.G.A. y la hemoglobina en ambos grupos disminuye en el tiempo, lo que se hace estadísticamente significativo (p < 0,05) desde el día 41 p.t.. Los otros constituyentes determinados no sufrieron variaciones significativas. Al comparar los valores sanguíneos entre ambos grupos no se observaron diferencias entre ellos durante todo el período estudiado.

TABLA N º 1 CONSTITUYENTES SANGUINEOS DE OVINOS CON Y SIN TRATAMIENTO CON CLOSANTEL (5 mg/kg).

Tiempo de Tratamiento(días)

0

10

27

41

55

62

V.G.A. (1/1)

Testigo

36,0 ±3,7*(a)

36,0 ±3.0

34,7 ±2.9

34,1 ±2,1(b)

30,7 ±6,8(c)

31,7 ±2,1(d)

Testigo

39,2 ±1,7 (a)**

35,0 ±1.6

35,6 ±2.1

35,0 ±1,3(b)

34,2 ±2,4(c)

34,4 ±1,6(d)

H.b. (g/dl)

Tratado

12,8 ±1,1(a)

12,5 ±1.1

12,2 ±0.9

12,0 ±0,7(b)

11,7 ±0,9(c)

11,5 ±0,6(d)

Testigo

14,1 ±0,6(a)

12,2 ±0.9

13,2 ±0.6

13,1 ±1,1(b)

12,1 ±0,9(c)

12,8 ±0,5 (d)

P.P.T.(g/l)

Tratado

72,0 ±4.0

72,0 ±3.0

70,0 ±3.0

70,0 ±3.0

70,0 ±3.1

73,0 ±4.0

Testigo

73,0 ±5.0

68,0 ±3.0

70,0 ±8.0

73,0 ±4.0

71,0 ±4.0

75,0 ±6.0

Albúmina (g/l)

Tratado

33,0 ±5,0 **

36,0 ±2.0

33,0 ±3.0

36,0 ±4.0

33,0 ±2.0

35,0 ±2.0

Testigo

32,0 ±6.0

37,0 ±9.0

33,0 ±4.0

37,0 ±3.0

35,0 ±2.0

34,0 ±2.0

A.A.T.(Ui/l)

Tratado

66,0 ±17.7

51,8 ±13.2

45,2 ±8.9

57,1 ±8.9

50,4 ±13.0

52,1 ±8.6

Testigo

52,7 ±10.6

57,4 ±28.6

40,8 ±6.3

43,0 ±7.3

45,0 ±2.1

45,8 ±7.9

G.G.T.(Ui/l)

Tratado

52,0 ±7.4

54,0 ±12.0

51,9 ±10.4

54,7 ±13.1

53,0 ±11.0

55,0 ±8.5

Testigo

57,0 ±7.2

56,0 ±8.4

52,5 ±6.5

55,4 ±7.0

51,8 ±7.6

56,8 ±1.1

*X ± SX de 13 ovinos hembras 4-6 meses de edad **X ± SX de 5 ovinos hembras 4-6 meses de edad, sin tratamiento a-b; a-c; a-d = p < 0,05

Al examen microscópico del hígado, tanto de canículos biliares como de parénquima hepático de ambos grupos no se encontraron formas inmaduras ni adultas de F. hepatica.

En el Cuadro N° 2, se presentan los valores de los constituyentes sanguíneos obtenidos en el grupo tratado con Closantel, en dosis de 15 mg/kg de peso. No se presentaron variaciones en estos valores posterior al tratamiento, que sean significativamente diferentes al del período previo del tratamiento.

TABLA Nº2 CONSTITUYENTES SANGUINEOS DE OVINOS TRATADOS CON CLOSANTEL (15 mg/kg).

Tiempo de Tratamiento (días)

0

5

14

28

V.G.A. (1/1)

38,3 ±2,0*

38,2 ±1,4

39,3 ±2,1

39,1 ±2,2

Hb (g/dl)

13,2 ±0,4

12,9 ±0,5

13,8 ±1,2

13,4 ±1,5

P.P.T. (g/1)

74,0 ±1.0

72,0 ±2.0

75,0 ±2.0

69,0 ±3.0

Albúmina(g/L)

40,0 ±11

49,0 ±8.0

47,0 ±10.0

35,0 ±12.0

A.A.T. (UIL)

46,9 ±17,9

42,6 ±17,1

49,5 ±10,8

44,7 ±15,2

G.G.T. (UIL)

46,4 ±9,8

45,4 ±7,7

46,0 ±1,2

46,4 ±1,6

* ± S  de 5 ovinos Suffolk-Down, de 1 año de edad.

Análisis de Resultado

Los resultados se entregan como   ± desviación típica. Las diferencias intra e inter grupo se analizaron por una prueba de Análisis de Varianza y prueba de 't' de Student (Wonnacott y Wonnacott, 1972).

Discusión Los valores de los constituyentes sanguíneos obtenidos en todos los animales durante el período de la experiencia son similares a los entregados por Schalm et al., 1975; Kaneko, 1980 y González et al., 1983, para animales de la misma edad y sexo.

Al analizar el V.G.A. y la hemoglobina de los 18 ovinos seleccionados, con un peso inicial de 28 a 36 kg (4 a 5 meses de edad) se observó que tanto los animales tratados como los testigos (Cuadro 1) presentaron una disminución estadísticamente significativa de estos valores a partir del día 41 de la experiencia. Ello, indicaría que esta variación no sería consecuencia de la administración de la droga. Upcott et al., (1971) observaron una disminución similar hasta los 160 días de edad; Schalm et al., (1975) descubren este fenómeno en ovino estabulado de 2 a 8 meses de edad, atribuyendo esta disminución a un bajo aporte de hierro en la ración, como resultado al ser su alimentación con heno de alfalfa.

El ensayo para evaluar el efecto de la droga con una dosis mayor (15 mg/kg de peso) se realizó en ovinos machos de 1 año de edad a fin de evitar variaciones en los constituyentes posterior a la administración de la droga hasta 28 días p.t.

Si bien Closantel en dosis de 5 y 15 mg/kg de peso no determinó variaciones de los constituyentes medidos, sería de interés determinar si ello ocurre en ovinos en otras condiciones de manejo o estado parasitario, puesto que la droga se uniría en circulación a la albúmina, protegiendo de esa forma su ingreso al hepatocito (Van den Bossche et al., 1980) y es esta proteína la que se encuentra disminuida en fasciolasis crónica.

Bibliografía

– ARAYA, V.O. 1967. Evaluación de la técnica de Teuscher en el examen coprológico para el diagnóstico parasitario en el ovino. Tesis Med. Vet. Facultad Med. Vet. U. Austral, Chile. 44 pp.

– GONZALEZ, H.; PLAZA, J.; MONTES G.; PÉREZ R. y TORO, P. 1983. Actividad antihelmíntica de Niclofolan y Closantel contra Fasciola hepatica en ovinos. Bol. Chile. Parasit. 38: 42-43.

– KANE, H.J.; BEHN, C.A. and BRYANT, C. 1980. Metabolic studies on the new fasciolicidal drug, Closantel Mol. and Bioch. Parast. 1(6): 347-355.

– SCHALM, O.W.; JAIN, N.C. and CARROL, E.J. 1975. Veterinary hematology 3rd ed., Philadelphia. Lee and Fibiger 807 p.

– UPCOTT, D.H.; HERBERT, C. and ROBINS, C. 1971. Erythrocite and leukocyte parameters in new lambs. Res. Vet. Sci. 12: 474-477.

– VAN DEN BOSSCHE, H.; VERHOEVEN, O.; VAN PARIJS, H.; LAUWERS, H. and THIENPONT, D. 1979. Closantel, a new antiparastic hydrogen ionophore. Arch. Int. Physiol. et Bioch. 87: 851-852.

– VAN DEN BOSSCHE, H.; VERHOEVEN, H. 1983. Effects of albumin on the Closante-induced alterations of mitocondrial processes. 15th FEBS Meeting, S-15.

– VERHEYEN, A.; VAN PARIJS, H.; LAUWERS, H. and THIENPONT, D. 1980. The Influence of Closantel administration to sheep on the ultraestructure of the adult liver fluke Fasciola hepatic. In: The Host Invader Interplay, Van den Bossche Ed. Elsevier/N-H Biomedical Press. Amsterdam. 705-708.

– WEINBACH, E.C. and GARBU, J. 1966. Restoration of albumin of oxidative phosphorylation and related reactions. J. Bol. Chem. 241: 169-175.

– WONNACOTT, H.T.; WONNACOTT, J.R. 1972. Introductory statistics, 2nd ed. N.Y. JW & Sons Inc. 509 p.

– KANEKO, J.J. 1980. Biochemistry of domestic animals 3rd ed. N.Y. Academic Press. 832 P.